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ELISA實驗前的準(zhǔn)備

1，仔細閱讀說明書

2，承認試劑盒在有效期內(nèi)

3，按說明書承認全部試劑*(數(shù)量、體積)

4，標(biāo)本制備要標(biāo)準(zhǔn)，每份標(biāo)本體積要按2-3個復(fù)孔以上的量制備(貯存)，盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實驗者，留意低溫保存

5，準(zhǔn)備好全部實驗額定所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機等

6，根據(jù)檢測標(biāo)本數(shù)量承認所需試劑的量

7，按說明書將所用試劑平衡至室溫，配制所需試劑 DIY夾心法ELISA常見技能攻略

8，選擇抗體時選擇一個單抗和一個多抗進行配對；若選擇兩個單抗，有必要辨認不同表位的抗體；好從同一家公司選擇抗體對。

9，ELISA實驗中為了承認佳信號和低布景應(yīng)將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預(yù)實驗中進行彼此相抗的滴定。一起，應(yīng)包括在恰當(dāng)規(guī)劃內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋。按試劑說明書慣例提供的規(guī)劃進行操作。

10，標(biāo)準(zhǔn)品的配制：對于每種細胞因子應(yīng)仔細閱讀說明書，留意每批的細節(jié)。在運用細胞因子前，瞬時離心試劑瓶，盡可能多地收回其間的細胞因子。根據(jù)每批說明書中的細節(jié)，將凍干的細胞因子復(fù)溶。

11，一般待測抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性規(guī)劃的可通過將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml。可利用標(biāo)準(zhǔn)的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改動酶底物系統(tǒng)可在必定規(guī)劃內(nèi)提高靈敏度。

12，為了優(yōu)化靈敏度，建議過夜孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本。

13，若運用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng)，應(yīng)制止在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。

14，當(dāng)測定混合液體中的抗原時，如血清，建議在標(biāo)本稀釋液中加不相干的Ig.